[摘要]該實驗研究了穿心蓮總內(nèi)酯骨架片的處方工藝及其體外釋藥行為。通過單因素試驗，以不同型號及用量的羥丙甲基纖維素(HPMC)為主要考察因素，以3種內(nèi)酯成分累積釋放度為評價指標(biāo)，優(yōu)選出最佳處方，所制緩釋片無突釋現(xiàn)象，緩釋周期14 h。采用零級、一級、Higuchi及Peppas方程判斷穿心蓮3種內(nèi)酯類成分的釋藥機制，結(jié)果表明總內(nèi)酯釋放行為符合Higuchi模型，釋放機制為骨架溶蝕機制。該法制備的穿心蓮總內(nèi)酯骨架片制備工藝簡單易行，具有良好的釋放性能。

　　[關(guān)鍵詞]臨床醫(yī)學(xué)論文發(fā)表,穿心蓮,總內(nèi)酯,緩釋片,制備,釋放

　　Preparation of hydrophilic matrix sustained release tablets of total lactones from

　　Andrographis paniculata and study on its in vitro release mechanism

　　XU Fang-fang1，2， SHI Wei1，3， ZHANG Hui2，3， GUO Qing-ming2，3， WANG Zhen-zhong2，3，

　　BI Yu-an2，3， WANG Zhi-min3， XIAO Wei2，3*

　　(1. Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210000， China;

　　2. Jangsu Kanion Pharmaceutical Co.， Ltd.， Lianyungang 222001， China;

　　3. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process， Lianyungang 222001， China)

　　[Abstract]In this study， hydrophilic matrix sustained release tablets of total lactones from Andrographis paniculata were prepared and the in vitro release behavior were also evaluated. The optimal prescription was achieved by studying the main factor of the type and amount of hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) using single factor test and evaluating through cumulative release of three lactones. No burst drug release from the obtained matrix tablets was observed. Drug release sustained to 14 h. The release mechanism of three lactones from A. paniculata was accessed by zero-order， first-order， Higuchi and Peppas equation. The release behavior of total lactones from A. paniculata was better agreed with Higuchi model and the drug release from the tablets was controlled by degradation of the matrix. The preparation of hydrophilic matrix sustained release tablets of total lactones from A. paniculata with good performance of drug release was simple.

　　[Key words]Andrographis paniculata; total lactones; matrix tablets; preparation; release

　　doi：10.4268/cjcmm20150115

　　穿心蓮是爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees的干燥全草或葉，具有清熱解毒、消炎、消腫止痛的作用，主要用于治療細(xì)菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃體炎、腸炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等[1]，其主要活性成分為穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯[2];親水凝膠骨架片是緩釋制劑骨架片中的一種，能夠降低血藥濃度波動，減少給藥次數(shù)，提高藥物療效，并且制備工藝簡單，易投入工業(yè)化生產(chǎn)[3-7]，因此本實驗制備了穿心蓮總內(nèi)酯親水凝膠骨架片，并對該制劑的釋藥行為和釋藥機制進(jìn)行了研究[8-11]，以期為穿心蓮總內(nèi)酯新型劑型的開發(fā)提供一定的依據(jù)。 　　1材料

　　1.1穿心蓮總內(nèi)酯部位的制備

　　藥材：穿心蓮藥材購自安徽亳州，經(jīng)江蘇康緣大藥房有限公司主管藥師吳舟鑒定為爵床科植物穿心蓮A. paniculata (Burm.f.)Nees的干燥全草。

　　總內(nèi)酯部位的制備：穿心蓮藥材用10倍量95%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，減壓回收濃縮，得到濃縮液，加入活性碳，熱處理30 min，趁熱抽濾，濃縮至無醇味，得到水溶液，經(jīng)乙酸乙酯萃取，濃縮至有微量黃色結(jié)晶析出，放置，抽濾，得黃色粉末，晾干即得，經(jīng)HPLC測定，其總內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于50%，其中含穿心蓮內(nèi)酯45.79%，脫水穿心蓮內(nèi)酯7.16%，新穿心蓮內(nèi)酯20.47%。

　　1.2儀器與試劑

　　BP211D型電子分析天平(METTLER TOLEDO);DHG-9143BS-III電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司);YD-20智能片劑硬度儀(天津大學(xué)無線電廠);THP 花籃式壓片機(中外合資上海天祥・健臺制藥機械有限公司);D-800LS智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無線電廠制造);Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。

　　穿心蓮內(nèi)酯(中國食品藥品檢定研究院，批號110797-201108);脫水穿心蓮內(nèi)酯(成都曼斯特生物科技有限公司，批號MUST-13010310);新穿心蓮內(nèi)酯(成都曼斯特生物科技有限公司，批號MUST-12082301);羥丙基甲基纖維素(上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司，批號PD379556);羧甲基淀粉鈉(曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號1307013);十二烷基硫酸鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20110331);微晶纖維素(曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號F1309005);乳糖(江蘇道寧藥業(yè)有限公司，批號F1307036);硬脂酸鎂(曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號F1306030)。

　　2方法

　　2.1制備工藝

　　按處方量稱取過80目篩的主藥和輔料，主藥-輔料1∶1，片重3 g，采用等量遞加法混勻，加入適量無水乙醇作為潤濕劑制軟材，過20目篩制粒，于60 ℃干燥2 h，再過18目篩整粒，干顆粒中加入適量硬脂酸鎂，混勻，壓片，控制該片硬度在8.0～10.0 kg・cm-2，即得。

　　2.2體外釋放度測定

　　2.2.1溶出介質(zhì)的確定

　　穿心蓮內(nèi)酯難溶于水，因而要在溶出介質(zhì)中加入表面活性劑來增加溶解度。本實驗考察了質(zhì)量濃度為0.2%，0.5%，1.0%的十二烷基硫酸鈉(SDS)和0.2%，0.5%，1.0%的聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫80)。各取穿心蓮總內(nèi)酯粉末4.5 g置于90 mL上述溶液中，水浴(37±0.5) ℃，實時振搖，觀測穿心蓮內(nèi)酯粉末的溶解情況。結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯粉末20 min內(nèi)完全溶解于0.5%和1.0%的SDS，最終選擇0.5%的SDS為體外釋放測定介質(zhì)。

　　2.2.2溶出測定方法的建立

　　2.2.2.1色譜條件Waters symmetry C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相甲醇-水52∶48;流速1.0 mL・min-1;穿心蓮內(nèi)酯檢測波長225 nm;脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長254 nm;新穿心蓮內(nèi)酯檢測波長210 nm;柱溫室溫;進(jìn)樣量10 μL。

　　2.2.2.2溶液制備按2010年版《中國藥典》第二部附錄XD溶出度測定第一法，以0.5%SDS溶液900 mL為介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r・min-1，溫度為(37±0.5) ℃，按設(shè)定時間點取樣4 mL，過0.8 μm微孔濾膜，取適量續(xù)濾液，用等體積乙酸乙酯萃取，N2吹干，甲醇復(fù)溶，得供試品溶液;取穿心蓮內(nèi)酯對照品(Ⅰ)、脫水穿心蓮內(nèi)酯(Ⅱ)、新穿心蓮內(nèi)酯(Ⅲ)對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含0.1 mg的溶液，即得對照品溶液。

　　2.2.2.3系統(tǒng)適用性試驗在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣對照品溶液和供試品溶液，色譜圖見圖1，各色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯計算不低于2 000，拖尾因子在0.95～1.05。

　　2.2.2.4線性關(guān)系取對照品母液，用移液槍2倍體積往下稀釋，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL，按2.2.2.1項下色譜條件，進(jìn)樣分析并記錄峰面積。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以對照品的濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得各回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍為：穿心蓮內(nèi)酯y=18.198x+95.876，r=0.999 9;脫水穿心蓮內(nèi)酯y=14.869x+88.402，

　　r=0.999 8;新穿心蓮內(nèi)酯y=11.502x+62.894，r=0.999 6。結(jié)果表明：穿心蓮內(nèi)酯，脫水穿心蓮內(nèi)酯，新穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量濃度在13.31～426，14.58～466.7，11.35～363.33 mg・L-1線性關(guān)系良好。

　　2.2.2.5精密度試驗制備供試品溶液6份，進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。測得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.40%，0.30%，0.70%，表明儀器精密度良好。

　　2.2.2.6重復(fù)性試驗取上述同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。測得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.70%，0.40%，0.30%，表明方法重復(fù)性良好。

　　2.2.2.7穩(wěn)定性試驗取新制備的同一供試品溶液，室溫放置，于0，4，8，12，18，24 h進(jìn)樣，記錄峰面積。測得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯峰面積RSD分別為1.0%，0.70%，0.60%，表明供試溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。　　2.2.2.8加樣回收率試驗取續(xù)濾液1 mL，加入對照品溶液，按2.2.2.2項下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣分析并記錄峰面積。測得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯平均回收率分別為99.2%，99.6%，99.8%;RSD分別為1.9%，1.8%，1.4%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

　　2.3處方及工藝篩選

　　2.3.1HPMC型號及用量對釋放速率的影響

　　固定主藥含量(主藥-輔料1∶1)，分別選用3種型號的HPMC(K4M，K100LV，E50LV)作為骨架材料，黏度K4M> K100LV>E50LV，結(jié)果表明， E50LV，K100LV，K4M都可以起到緩釋效果，見圖2。同等用量下，高黏度HPMC與低黏度相比，水化速度快，吸水能力強，吸水后迅速膨脹形成凝膠層，且溶蝕較慢，考慮到后續(xù)的實驗工作中涉及許多過膜等操作步奏，鑒于高黏度HPMC的不易透過0.45 μm的濾膜，本實驗選用緩釋效果適宜且容易透過0.45 μm濾膜的E50LV為骨架材料。固定主藥含量(主藥-輔料1∶1)，每片中含HPMC(E50LV)分別為片重的20%，25%，30%，35%，加入適量的填充劑使片重保持一致。隨著HPMC用量增加，水化速率加快，形成的凝膠層增厚，強度增大，藥物釋放速率越低，因此可知HPMC用量是影響藥物釋放的主要因素，見圖3。綜合考慮，初步選35%的HPMC用量。

　　2.3.2不同黏合劑用量對釋放速率的影響

　　以羥丙甲纖維素(50cp)為黏合劑，采用內(nèi)加法考察用量分別占片重2%，3%，4%時，對藥物釋放速率的影響。隨著黏合劑用量增加，藥物釋放速率明顯降低，見圖4。這可能是由于黏合劑使藥物分子之間以及藥物和輔料之間結(jié)合力變強，形成凝膠不利于藥物的釋放，結(jié)合制粒的難以成度及顆粒與粉末之間的比例，最終確定其用量為片重的2%。

　　2.3.3填充劑用量對釋放速率的影響

　　固定主藥含量(主藥-輔料1∶1)，分別考察乳糖-微晶纖維素1∶1，1∶2，2∶1時對藥物釋放的影響，結(jié)果見圖5，比例的變化對釋放度的影響不大，結(jié)合制粒過程中制粒的難易、顆粒與粉末之間的比例及黏合劑的用量，最終確定其比例為片重的乳糖-微晶纖維素 2∶1。

　　2.3.4工藝驗證

　　按最優(yōu)處方工藝制備3批穿心蓮總內(nèi)酯骨架片樣品，并進(jìn)行體外釋放度考察，累積釋放曲線見圖6，3批樣品的釋藥速率無顯著性差異，表明所優(yōu)選的處方工藝合理可靠，重復(fù)性良好。

　　選擇其中一批樣品，采用HPLC對穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行釋放度測定，同時采用變異因子f1和相似因子f2法進(jìn)行考察，f1落在0～15，表明2種成分的溶出度相似，f2在50～100，f2越接近100，說明所比較的溶出曲線越相似。

　　結(jié)果表明，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯之間兩兩相似性良好，累積釋放曲線見圖7，相似因子、變異因子數(shù)據(jù)見表1，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯達(dá)到了同步釋放。

　　2.4模型擬合與釋藥機制結(jié)果分析

　　為進(jìn)一步分析穿心蓮總內(nèi)酯骨架片的釋藥行為，將按最優(yōu)處方工藝制備的穿心蓮總內(nèi)酯骨架片體外釋放結(jié)果按Higuichi方程(Mt/M∞=kt1/2)、一級方程(ln(1-Mt/M∞)=-kt)和零級方程(Mt/M∞= kt)進(jìn)行擬合，并用相關(guān)系數(shù)判斷其擬合程度，以r值最大為優(yōu);為研究藥物從骨架中的釋放機制，采用Peppas方程(Mt/M∞=ktn)進(jìn)行數(shù)學(xué)模型擬合，Peppas方程認(rèn)為：當(dāng)n<0.45時，藥物釋放機制為Fick擴(kuò)散;當(dāng)0.450.89時，為骨架溶蝕機制。穿心蓮總內(nèi)酯骨架片體外釋藥過程呈現(xiàn)Higuchi動力學(xué)模型;n>0.89，釋藥機制為骨架溶蝕機制，結(jié)果見表2。

　　3討論

　　在設(shè)計穿心蓮總內(nèi)酯骨架片時，藥物中穿心蓮總內(nèi)酯的溶解性是重要的考慮因素，對于水溶性藥物，高黏度的羥丙甲纖維素(HPMC)易于形成穩(wěn)定的擴(kuò)散控制系統(tǒng);對于難溶于水的藥物，應(yīng)采用低黏度HPMC，溶蝕是最主要的釋放機制。由于穿心蓮總內(nèi)酯為難溶于水的藥物，本實驗考察了3種HPMC型號：K4M，K100LV，E50LV，三者黏度K4M>K100LV>E50LV，隨著HPMC的相對分子質(zhì)量的增加，HPMC的黏度變大，HPMC 的分子鏈變長，形成的凝膠層不容易溶蝕，導(dǎo)致藥物的釋放速率降低，不太適宜水難溶性藥物的溶解[12]。因而針對穿心蓮內(nèi)酯，低黏度的E50LV羥丙甲纖維素較適宜。

　　本課題中研究對象穿心蓮總內(nèi)酯為自制。根據(jù)2010年版《中國藥典》二部附錄XIXD對緩釋、控釋和遲釋制劑指導(dǎo)原則的要求，本研究首次同時對其主要藥效成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯這3個成分的體外釋藥行為進(jìn)行考察，同時進(jìn)行了釋藥模型的擬合，并且對其釋藥機制做了分析，為預(yù)測中藥穿心蓮多組分的體內(nèi)釋藥提供了初步的理論和實驗依據(jù)。

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