[摘要]采用大鼠在體腸單向灌流實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停�利用HPLC-ELSD測(cè)定腸灌流液中蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖和巴戟甲素等5種低聚糖的含量，研究各低聚糖在小腸段(十二指腸、空腸、回腸)和結(jié)腸的吸收情況，并考察藥物濃度、灌流液pH以及P-糖蛋白(P-gp)抑制劑對(duì)藥物吸收的影響，得出各低聚糖成分在大鼠體內(nèi)的腸吸收機(jī)制。結(jié)果顯示5種低聚糖均為全腸道吸收的藥物，吸收速率與灌流液pH、藥物濃度和腸段部位有關(guān)。鹽酸維拉帕米可顯著增加蔗糖與巴戟甲素的吸收量，提示蔗糖與巴戟甲素是P-gp的底物。5種低聚糖在大鼠腸道內(nèi)的吸收機(jī)制以被動(dòng)擴(kuò)散方式為主，不存在飽和吸收，其在全腸段的吸收均較好，吸收部位主要在十二指腸和空腸。

　　[關(guān)鍵詞]臨床醫(yī)學(xué)論文,巴戟天低聚糖,腸吸收,單向灌流法,P-糖蛋白

　　Study on intestinal absorption features of oligosaccharides in

　　Morinda officinalis How.with sigle-pass perfusion

　　DENG Shao-dong1， ZHANG Peng2， LIN Li2*， XIAO Feng-xia2， LIN Jing-ran2

　　(1.The Second School of Clinical Medicine， Guangdong Medical College， Dongguan 523808， China;

　　2. College of Chinese Materia Medica， Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China)

　　[Abstract]To study the in situ intestinal absorption of five oligosaccharides contained in Morinda officinalis How. (sucrose， kestose， nystose， 1F-Fructofuranosyinystose and Bajijiasu). The absorption of the five oligosaccharides in small intestine (duodenum， jejunum and ileum) and colon of rats and their contents were investigated by using in situ single-pass perfusion model and HPLC-ELSD. The effects of drug concentration， pH in perfusate and P-glycoprotein inhibitor on the intestinal absorption were investigated to define the intestinal absorption mechanism of the five oligosaccharides in rats. According to the results， all of the five oligosaccharides were absorbed in the whole intestine， and their absorption rates were affected by the pH of the perfusion solution， drug concentration and intestinal segments. Verapamil Hydrochloride could significantly increase the absorptive amount of sucrose and Bajijiasu， suggesting sucrose and Bajijiasu are P-gp′s substrate. The five oligosaccharides are absorbed mainly through passive diffusion in the intestinal segments， without saturated absorption. They are absorbed well in all intestines and mainly in duodenum and jejunum.

　　[Key words]oligosaccharide extracted from Morinda officinalis; intestinal absorption; single-pass intestinal perfusion; P-glycoprotein

　　doi：10.4268/cjcmm20150126

　　巴戟天為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How. 的肉質(zhì)根，歸腎、肝經(jīng)，具有補(bǔ)腎助陽(yáng)之功效，自古被譽(yù)為“補(bǔ)腎陽(yáng)之要藥”，已證實(shí)巴戟天糖類(lèi)物質(zhì)含量近50%，其中以低聚糖類(lèi)成分為主[1]。近期藥效研究表明，巴戟天低聚糖(oligosaccharide extracted from Morinda officinalis，OMO)可顯著提高擬癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[2]、改善癡呆癥狀[3]，其中巴戟甲素、耐斯糖等低聚糖單體活性成分也顯示具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用[4]、抗抑郁[5]、抗骨質(zhì)疏松[6]等多種生物活性，表明巴戟天低聚糖類(lèi)成分具有顯著的開(kāi)發(fā)利用前景。目前，以巴戟天為原料開(kāi)發(fā)出的藥品均以口服劑型為主，如巴戟天寡糖膠囊、巴戟口服液等，然而關(guān)于巴戟天低聚糖的胃腸道吸收機(jī)制研究的報(bào)道較少。因此，本研究采用大鼠在體腸單向灌流模型考察該巴戟天低聚糖有效部位中蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖和巴戟甲素等5種低聚糖類(lèi)成分的大鼠腸吸收特點(diǎn)，以揭示巴戟天低聚糖類(lèi)成分的腸道吸收機(jī)制，確定各成分的最佳吸收部位，并考察了P-gp對(duì)巴戟天低聚糖類(lèi)成分吸收的影響，以期為巴戟天低聚糖類(lèi)藥物的劑型開(kāi)發(fā)及其在臨床上的合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。 　　1材料

　　1.1試藥

　　巴戟天低聚糖(OMO，自制，經(jīng)鑒定純度>95%);蔗糖(廣東光華化學(xué)，批號(hào)20060717)，蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖(日本W(wǎng)AKO公司，批號(hào)分別為295-64111，292-64121，299-64131)，巴戟甲素(按專(zhuān)利201010224513.2方法自制)，純度均>98%;鹽酸維拉帕米(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100223-200102);乙腈、甲醇(色譜純，德國(guó)Merk公司);空白灌流液( Krebs-Ringer′s營(yíng)養(yǎng)液，自配，每升含NaCl 7.8 g，KCl 0.35 g，CaCl2 0.12 g，MgCl2 0.02 g，NaH2PO4 0.32 g，NaHCO3 1.37 g，用NaOH或H3PO4調(diào)節(jié)pH);氨基甲酸乙酯、三乙胺等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純;實(shí)驗(yàn)用水均為自制超純水。

　　1.2儀器

　　美國(guó)WATERS 2695型液相系統(tǒng)配備WATERS 2424型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，BP211D型電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司)，Genpure超純水系統(tǒng)(德國(guó)TKA公司)，HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州普天儀器公司)，BT100-1F數(shù)顯恒流泵(保定蘭格恒流泵有限公司)，PHB-3型pH計(jì)(上海三信儀表廠)，KQ-500型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，佳美SK-1快速混勻器(江蘇金壇市佳美儀器廠)，TGL-16aR型臺(tái)式冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

　　1.3動(dòng)物

　　雄性SD大鼠，體重200～250 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK(粵)2008-0020，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h，自由飲水。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1色譜條件

　　色譜柱采用Waters XBridgeTM Amide(4.6 mm×150 mm，3.5 μm)，柱溫40 ℃，以乙腈為流動(dòng)相A，0.2%三乙胺溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫0～25 min，75%～65%A;25～55 min，65%～60%A;55～56 min，60%～25%A;56～60 min，25%A;60～63 min，25%～75%A;63～70 min，75%A;流速0.6 mL・min-1;漂移管溫度90 ℃;噴霧器模式加熱，100%;氣壓40 Pa;增益20倍;進(jìn)樣體積10 μL。

　　2.2對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱(chēng)取蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素對(duì)照品適量，加入空白灌流液制得每1 mL含蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素分別為2.03，3.01，4.30，5.90，10.0 mg的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

　　2.3樣品處理

　　取樣品液2 mL，置于4 ℃離心機(jī)中1萬(wàn) r・min-1，7 250×g離心10 min，取上清液過(guò)0.22 μm水系微孔濾膜，取續(xù)濾液10 μL 直接進(jìn)樣。

　　2.4方法學(xué)考察

　　2.4.1專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)分別取空白灌流液、含OMO的灌流液、經(jīng)灌流后含OMO的樣品液、含維拉帕米的灌流樣品液及混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，按2.3項(xiàng)下處理，進(jìn)樣分析，見(jiàn)圖1。

　　2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別取2.2項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.25，0.50，1.0，2.0，2.5 mL置于5 mL容量瓶中，以空白灌流液定容至刻度，搖勻后，按2.3項(xiàng)下處理， 進(jìn)樣10 μL。以各成分進(jìn)樣質(zhì)量X(ng)的對(duì)數(shù)值(lgX)為橫坐標(biāo)，以其峰面積積分值Y的對(duì)數(shù)值(lgY)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，見(jiàn)表1。

　　2.4.3精密度及回收率精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，以空白灌流液稀釋?zhuān)�分別配制得蔗糖(0.101 5，0.406 0，1.015 g ・L-1)、蔗果三糖(0.150 5，0.602 0，1.505 g ・L-1)、耐斯糖(0.215 0，0.860 0，2.150 g ・L-1)、1F-果呋喃糖基耐斯糖(0.295 0，1.180，2.950 g ・L-1)、巴戟甲素(0.500 0，2.000，5.000 g ・L-1)不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)下處理，平行制備5份，于

　　同一天內(nèi)測(cè)定5次和5 d內(nèi)分別測(cè)定，計(jì)算方法回收率、日內(nèi)和日間精密度(用RSD表示)，見(jiàn)表2。

　　2.4.4灌流液中低聚糖類(lèi)成分的穩(wěn)定性考察取大鼠禁食12 h后，用空白灌流液進(jìn)行大鼠在體單向腸灌流，取0～120 min內(nèi)腸灌流液。精密稱(chēng)取適量OMO，以上述腸灌流液溶解后在37 ℃水浴中放置

　　12 h，分別于0，2，4，8，12 h取樣，按樣品處理方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣分析，以各時(shí)間點(diǎn)的峰面積與0 h的峰面積比值作為剩余百分含量，考察其穩(wěn)定性。計(jì)算得各組分平均剩余含量均大于95%，RSD均小于2.1%，結(jié)果表明，12 h內(nèi)各待測(cè)物含量未發(fā)生明顯變化，此條件下各低聚糖類(lèi)成分的穩(wěn)定性良好，見(jiàn)表3。

　　2.4.5物理吸附的考察分別取腸段和灌流管置于含OMO 12.001 g・L-1的灌流液中37 ℃恒溫水浴孵育30 min，孵育前后的供試品溶液，按2.3項(xiàng)下操作，以后者對(duì)前者的各組分峰面積比值計(jì)算絕對(duì)回收率。各組分的絕對(duì)回收率均大于95%，表明大鼠腸壁和灌流管對(duì)OMO中5種低聚糖類(lèi)成分基本無(wú)物理吸附，見(jiàn)表4。 　　2.5大鼠在體腸灌流試驗(yàn)[7-8]

　　2.5.1方法取生理鹽水、OMO灌流液、供試液和收集液小瓶置37 ℃恒溫水浴，將禁食過(guò)夜的大鼠(自由飲水) ，腹腔注射20%烏拉坦溶液(200 mg・kg-1) 麻醉。背位固定，沿腹中線打開(kāi)腹腔，選取實(shí)驗(yàn)所需的各個(gè)腸段，取約10～15 cm于兩端切口，插管并結(jié)扎，用預(yù)熱至37 ℃的生理鹽水緩慢地將腸內(nèi)容物沖洗干凈，然后用生理鹽水沖洗30 min，將傷口用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保濕，紅外燈下保溫。實(shí)驗(yàn)時(shí)取一定濃度的OMO灌流液(預(yù)熱37 ℃) 100 mL，先以1.0 mL・min-1的流速灌流10 min，再將流

　　速調(diào)為約0.2 mL・min-1，開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔15 min迅速更換1次已知質(zhì)量的供試液小瓶和收集液小瓶，直至120 min，稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算灌入和收集的供試液質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，剪下被考察腸段，測(cè)量其長(zhǎng)度(L)和橫截面半徑(r)。

　　大鼠各個(gè)腸段的選擇：十二指腸段自幽門(mén)1 cm處開(kāi)始向下取10 cm，空腸段距幽門(mén)15 cm處開(kāi)始向下取10 cm，回腸段自盲腸上行20 cm處開(kāi)始向下取10 cm，結(jié)腸段從盲腸后段開(kāi)始向下取10 cm。

　　2.5.2灌流液體積的校正及數(shù)據(jù)處理小腸不僅吸收藥物，也吸收和分泌水分，導(dǎo)致灌流液體積變化，因此，不能用直接測(cè)定藥物濃度的方法計(jì)算藥物的吸收。本實(shí)驗(yàn)采用重量法對(duì)灌流液流入和流出的體積進(jìn)行校正，消除其體積變化的影響。具體步驟為精密量取供試液0.50 mL 放入已經(jīng)稱(chēng)重的干凈玻璃瓶中，稱(chēng)量液體的質(zhì)量，算出其密度ρin。從接收液樣品中精密量取0.50 mL，放入已經(jīng)稱(chēng)重的干凈玻璃瓶中，稱(chēng)量液體的質(zhì)量，計(jì)算出接收液的平均密度ρout。Vin=min/ρin;Vout= mout /ρout;式中min，mout分別為一定時(shí)間內(nèi)進(jìn)出腸道灌流液的質(zhì)量。按下面的公式計(jì)算藥物吸收速率常數(shù)(Ka) 和藥物表觀滲透系數(shù)(Papp) ，式中Vin和Vout分別為灌入和收集的供試液體積(mL);Cin和Cout分別為進(jìn)口和出口處緩沖液中的藥物質(zhì)量濃度(g・L-1);L和r分別為被考察腸段長(zhǎng)度(cm) 和半徑(cm);Qin為灌流速度(0.2 mL・min-1) ;t為灌流時(shí)間(h);由灌流前后剩余藥量差值求出每小時(shí)單位面積腸壁上的各組分的累積吸收量A(μg・cm-2・h-1);Ka，Papp，A為8個(gè)時(shí)間段(0～120 min)樣品的平均值。測(cè)定結(jié)果以±s表示，組間差異比較采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05表示差異有顯著性。

　　Papp=-QinlnCoutCin×VoutVin2πrL(1)

　　Ka=1-CoutCin×VoutVin×Qinπr2L(2)

　　A=Cin×Vin-Cout×Vout2πrLt(3)

　　2.6灌流液pH對(duì)OMO在體腸吸收的影響

　　分別用pH 5.4，6.8，7.4的Kreb-Ringer′s灌流液(OMO質(zhì)量濃度為12.1 g・L-1)對(duì)全腸段灌流，考察pH對(duì)OMO在全腸段吸收的影響。

　　經(jīng)方差分析，蔗糖在pH 7.4，6.8，5.4灌流液中的Papp無(wú)顯著性差異;蔗果三糖、巴戟甲素在pH 7.4灌流液中的Papp與pH 6.8，5.4有顯著性差異(P<0.05);耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖在pH 5.4灌流液中的Papp與pH 7.4有顯著性差異(P<0.05)，pH 7.4與pH 6.8之間無(wú)顯著性差異。各低聚糖在pH 7.4灌流液中的Papp與Ka均較大，因此選擇pH 7.4的灌流液進(jìn)行試驗(yàn)，見(jiàn)表5。

　　2.7OMO濃度對(duì)腸吸收的影響

　　分別用OMO質(zhì)量濃度為6.01，12.02，24.04 g・L-1的Kreb-Ringer′s灌流液(pH 7.4)對(duì)全腸段灌流，考察藥物濃度對(duì)其吸收的影響。

　　經(jīng)方差分析，OMO中5種成分在各自的3個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，在大鼠全腸段的吸收速率(Ka)均無(wú)顯著差異，其藥物累積吸收量隨灌流液藥物濃度的增加而近似線性地增加，說(shuō)明藥物不存在自身濃度

　　表5OMO中5種成分在不同pH灌流液中的吸收參數(shù)(±s，n=6)

　　Table 5Effects of perfusate′s pH on the Ka and Papp of five oligosaccharides in rats(±s，n=6)

　　抑制現(xiàn)象，提示OMO中5種低聚糖成分的在體腸吸收機(jī)制均以被動(dòng)擴(kuò)散為主，其吸收動(dòng)力學(xué)符合一級(jí)過(guò)程。

　　對(duì)各成分在全腸段的吸收進(jìn)行比較，方差分析結(jié)果顯示，高濃度和中濃度下，巴戟甲素與其他各成分之間的Ka存在顯著性差異(P<0.05);在低濃度下，巴戟甲素與蔗糖的吸收不存在顯著性差異，與其他3個(gè)成分之間存在顯著性差異(P<0.05)。同時(shí)，巴戟甲素的吸收參數(shù)(Ka，Papp，A)均大于其他各成分。各成分的吸收速率依次為：巴戟甲素>蔗糖>蔗果三糖>耐斯糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖，見(jiàn)表6。

　　2.8OMO在大鼠不同腸段中的吸收特點(diǎn)

　　取OMO質(zhì)量濃度為12.02 g・L-1的灌流液分別在十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸 4個(gè)腸段進(jìn)行灌流，考察OMO在大鼠各腸段的吸收情況。 　　分別對(duì)5種低聚糖成分在各腸段的吸收參數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示，蔗糖、蔗果三糖在十二指腸

　　吸與回腸、結(jié)腸的吸收有顯著性差異(P<0.05)，而十二指腸與空腸之間無(wú)顯著性差異，其中空腸的吸收速率較大，說(shuō)明蔗糖、蔗果三糖的吸收部位主要在空腸，各腸段的吸收速率依次為空腸>十二指腸>回腸>結(jié)腸;耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖在十二指腸的吸收與回腸、結(jié)腸的吸收有顯著性差異(P<0.05)，而十二指腸與空腸之間無(wú)顯著性差異，其中十二指腸的吸收速率較大，說(shuō)明耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖的吸收部位主要在十二指腸，各腸段的吸收速率依次為十二指腸>空腸>回腸>結(jié)腸;巴戟甲素在十二指腸的吸收與空腸、回腸、結(jié)腸的吸收均有顯著性差異(P<0.05)，說(shuō)明巴戟甲素的吸收部位主要在十二指腸，各腸段的吸收速率依次為十二指腸>空腸>回腸>結(jié)腸。

　　對(duì)不同腸段中各成分的吸收進(jìn)行比較，方差分析結(jié)果顯示，在十二指腸腸段，巴戟甲素與其他各成分之間均具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，且巴戟甲素的吸收參數(shù)(Ka，Papp，A)均大于其他成分，提示十二指腸段巴戟甲素的吸收相對(duì)較快，吸收速率依次為巴戟甲素>蔗糖>蔗果三糖>耐斯糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖;在空腸腸段，巴戟甲素與蔗糖、蔗果三糖之間無(wú)顯著性差異，巴戟甲素與耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖之間均有顯著性差異(P<0.05)，提示空腸段巴戟甲素與蔗糖、蔗果三糖的吸收情況相似，吸收速率依次為巴戟甲素>蔗果三糖>蔗糖>耐斯糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖;在回腸腸段，巴戟甲素與蔗糖之間無(wú)顯著性差異，巴戟甲素與蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖之間均有顯著性差異(P<0.05)，提示回腸段巴戟甲素與蔗糖的吸收情況相似，吸收速率依次為蔗糖>巴戟甲素>蔗果三糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖>耐斯糖;結(jié)腸段與回腸段比較結(jié)果一致，其吸收速率依次為蔗糖>巴戟甲素>蔗果三糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖>耐斯糖，見(jiàn)表7。

　　2.9P-gp抑制劑對(duì)OMO腸吸收的影響

　　以鹽酸維拉帕米作為P-gp抑制劑，分別在pH 7.4的Kreb-Ringer′s灌流液(OMO質(zhì)量濃度12.02 g・L-1)中加入鹽酸維拉帕米至0，0.6 mmol・L-1作為2組供試液。實(shí)驗(yàn)前分別用2組供試液以2.0 mL・min-1的流速快速平衡孵育腸段和灌流管10 min，其他操作同2.5.1項(xiàng)。對(duì)十二指腸灌流，考察P-gp抑制劑對(duì)OMO吸收的影響。

　　對(duì)各成分的2組吸收參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，加入P-gp抑制劑對(duì)蔗糖與巴戟甲素的Ka，Papp均有顯著性影響(P<0.05)，而對(duì)其他成分無(wú)顯著性影響(P>0.05)。鹽酸維拉帕米可顯著增加蔗糖與巴戟甲素的吸收量，這種促吸收效果是通過(guò)抑制P-gp的外排引起的，由此提示蔗糖與巴戟甲素是P-gp的底物，見(jiàn)表8。

　　3討論

　　本實(shí)驗(yàn)以O(shè)MO為研究對(duì)象，主要含有蔗糖(二糖)、巴戟甲素(二糖)、蔗果三糖(三糖)、耐斯糖(四糖)、1F-果呋喃糖基耐斯糖(五糖)等低聚糖成分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中顯示在全腸段吸收中，其吸收速率依次為二糖>三糖>四糖>五糖，推測(cè)可能與各成分的分子大小有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)條件中，各成分在不同腸段中的Papp均大于0.072 cm・h-1，說(shuō)明各低聚糖成分在整個(gè)腸段中吸收良好[9]，屬于高滲透性藥

　　物，主要與各成分均具有較強(qiáng)的親水性從而易于在腸道中吸收擴(kuò)散進(jìn)入體內(nèi)有關(guān)。

　　藥物進(jìn)入體循環(huán)的速度和程度是決定藥物療效及安全性的重要因素，藥物只有在預(yù)期的時(shí)間內(nèi)釋放并被有效部位吸收才能產(chǎn)生療效，故研究藥物的腸吸收特點(diǎn)將可以減少劑型設(shè)計(jì)的盲目性，為劑型的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可看出，巴戟天低聚糖中的成分主要在小腸段(十二指腸、空腸)中吸收，因此，可設(shè)計(jì)相應(yīng)的緩控釋制劑，準(zhǔn)確控制藥物釋放的部位和速率，提高巴戟天低聚糖的口服生物利用度。

　　與離體腸吸收實(shí)驗(yàn)相比，在體腸灌流法因不切斷血管和神經(jīng)系統(tǒng)，提高了腸段的生物活性。在體腸灌流主要分為在體單向腸灌流和在體循環(huán)腸灌流，在體循環(huán)腸灌流因灌流時(shí)間長(zhǎng)(4～6 h)和灌流速度較大(2～5 mL・min-1)對(duì)腸道的腸黏膜損傷較大，導(dǎo)致藥物的吸收增加，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真實(shí)情況存在較大誤差[10-12]。灌流速度在一定程度上代表腸道蠕動(dòng)的生理狀態(tài)，在健康志愿者體內(nèi)腸灌流實(shí)驗(yàn)中，灌流速度多選用2～3 mL・min-1，由于大鼠腸道的內(nèi)徑約為人腸道的1/10，因而單向腸灌流以較低灌流速度(0.2～0.3 mL・min-1)對(duì)需要考察的腸段進(jìn)行單向灌流，其吸收速率穩(wěn)定，與人體腸吸收有良好的相關(guān)性[13]。

　　P-gp屬多藥耐藥蛋白，通過(guò)將藥物從細(xì)胞內(nèi)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，參與藥物的吸收和靶組織轉(zhuǎn)運(yùn)，具有重要的生理學(xué)功能。當(dāng)某一藥物或化學(xué)成分影響了P-gp的活性，則能改變另一種藥物或成分的吸收速率及吸收程度，并最終影響其血藥濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸維拉帕米可顯著增加蔗糖與巴戟甲素的吸收量，這種促吸收效果是通過(guò)抑制P-gp的外排引起的，由此提示蔗糖與巴戟甲素是P-gp的底物，其相關(guān)的作用機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。 　　[參考文獻(xiàn)]

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